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重视离心机在PCR实验中的作用

离心机在PCR实验中起着重要的作用,PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。

下面简单介绍下PCR的实验步骤:

(1)在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      

10×PCR buffer                    

5 μl     dNTP mix (2mM)              

4 μl     引物1(10pM)                  

2 μl     引物2(10pM)                  

2 μl     Taq酶 (2U/μl)                

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

(2)调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min。

(3)结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

从以上反应步骤可以清楚看到,离心机在PCR实验中是必不可少的实验工具。

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